在分子生物学研究中,传统克隆方法步骤繁琐,成功率低,为了提高克隆效率,基于同源重组酶的无缝克隆技术应用而生。无缝克隆技术操作简单快速,不受到酶切位点的限制,可一次进行多个片段的拼接。Arcegen One Step Cloning Kit (1-7 Fragments) 通用一步法克隆试剂盒,全面优化克隆性能,提升你的实验体验,让科研变得轻松又高效!
精准拼接,随心所欲
满足1-7个DNA片段的定向无缝拼接,通过在插入片段的PCR引物5’端引入与线性化载体末端对应的同源序列,插入片段的两端与载体末端完美匹配,精准拼接,轻松实现高效重组。
图1 单片段高效重组:A:重组转化平板。载体( 10 kb )和插入片段(1 kb)摩尔比为1:2。C:插入片段PCR鉴定电泳图,M:10000 DNA Marker。载体量:40 ng/6 μL反应体系,反应条件:50℃,15 min。
图2 多片段轻松重组:A:重组转化平板。载体( 11.6 kb )和插入片段(1 kb + 1.6 kb + 1.8 kb)摩尔比为1:2。C:插入片段PCR鉴定电泳图,M:10000 DNA Marker,菌落PCR长度2.6 kb。载体量:200 ng/20 μL反应体系,反应条件:50℃,20 min。
化繁为简,新手无忧
只需将PCR产物与线性化载体混合,加入预混好的酶液,在50℃条件下孵育5分钟,然后进行常规的转化操作即可。无需复杂的酶切条件优化,无需繁琐的连接步骤,大大降低了实验难度。
图3 一步法克隆步骤示意图
高阳性率,出类拔萃
凭借独特的重组增强因子,显著提高了重组克隆效率,克隆阳性率可达95%以上。不需要筛选大量的克隆来寻找阳性结果,大大减少了实验的重复次数和工作量。
图4 和竞品A同时做6片段克隆转化,阳性率显著高于竞品A:A-B:重组转化平板。载体( 11.6 kb )和插入片段(0.5kb+0.7kb+1kb+1.6kb+1.8kb + 2 kb)摩尔比为1:2。C:插入片段PCR鉴定电泳图,M:10000 DNA Marker,菌落PCR长度2.6 kb。载体量:200 ng/20 μL反应体系,反应条件:50℃,50 min。
突破极限,挑战长片段克隆
轻松应对超长片段的克隆。载体片段连接长度可达25 kb以上,无论是构建复杂的基因组文库,还是研究超长基因的功能,它都能轻松搞定,让你的实验不再受限于片段长度。
图5 有效克隆连接超长片段:A:重组转化平板。载体(21 kb)和插入片段(4.5 kb)摩尔比为1:2。C:插入片段PCR鉴定电泳图,M:10000 DNA Marker。载体量:200 ng/20 μL反应体系,反应条件:50℃,40 min。
全面兼容,无所不能
兼容未纯化PCR产物、直接回收的PCR产物、低浓度的胶回收产物;适用于任何载体,兼顾粘性和平末端;可用于多片段、点突变等的克隆;可重组同源臂GC含量30%-70%的接头片段。
客户反馈
客户S*数据反馈:三片段连接性能好于竞品B,菌落数多,阳性率100%
图6 客户反馈,有效克隆连接三片段:A-D:重组转化平板。载体(4 kb)和插入片段(3片段大小为1-3 kb)。10μL低反应体系,优于竞品B。
客户W*数据反馈:四片段连接性能好,菌落数多,阳性率85%以上
图7 客户反馈,有效克隆连接四片段:A:重组转化平板。载体(3 kb)和插入片段(200 bp、200 bp、1200 bp、1400 bp)。6μL低反应体系。
Arcegen通用一步法克隆试剂盒,为科研人员节省了大量的时间和精力,还提高了实验的成功率和准确性,让克隆实验变得轻松又高效!
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中文名称 | 英文名称 | 产品货号 |
通用一步法克隆试剂盒(1-7片段) | 1-7Fragments One Step Cloning Kit | N132081 |